HA-Tag
Das HA-Tag ist ein Protein-Tag, der bei der Erzeugung und Charakterisierung von rekombinanten Proteinen verwendet wird.
Eigenschaften
[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]Das HA-Tag basiert auf einem Teil des Hämagglutinins (Position 98–106) und besitzt die Aminosäuresequenz YPYDVPDYA.[1] Es wurde 1988 von J. Field und Kollegen veröffentlicht[1] und ist eines der älteren Protein-Tags. Die monoklonalen Antikörper 12CA5 (Mausursprung) und 3F10 (Rattenursprung) binden an das HA-Tag.[2] Es kann am N- oder C-Terminus des Proteins angehängt werden.[3] Zur Erhöhung der Antikörperbindung kann es bis zu dreimal in Serie verwendet werden.[3] Das HA-Tag eignet sich nicht zur Reinigung von Proteinen aus apoptotischen Zellen, da es durch die Caspase-3 und Caspase-7 nach der Sequenz DVPD abgespalten wird.[4]
Einzelnachweise
[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]- ↑ a b J. Field, J. Nikawa, D. Broek, B. MacDonald, L. Rodgers, I. A. Wilson, R. A. Lerner, M. Wigler: Purification of a RAS-responsive adenylyl cyclase complex from Saccharomyces cerevisiae by use of an epitope addition method. In: Molecular and cellular biology. Band 8, Nummer 5, Mai 1988, S. 2159–2165, PMID 2455217, PMC 363397 (freier Volltext).
- ↑ Viki Allan: Protein Localization by Fluorescence Microscopy. OUP Oxford, 1999, ISBN 978-0-191-56591-5, S. 187.
- ↑ a b Michael Wink: An Introduction to Molecular Biotechnology. John Wiley & Sons, 2006, ISBN 978-3-527-31412-6, S. 217.
- ↑ L. Schembri, R. Dalibart, F. Tomasello, P. Legembre, F. Ichas, F. De Giorgi: The HA tag is cleaved and loses immunoreactivity during apoptosis. In: Nature methods. Band 4, Nummer 2, Februar 2007, S. 107–108, doi:10.1038/nmeth0207-107, PMID 17264856.